穩定細胞株構建
發布時間 :2017-07-30
篩選得到可穩定表達目的蛋白;篩選得到穩定沉默特定基因的細胞株。

       外源基因在細胞中的表達可分為兩大類,一類是瞬時表達,一類是穩定表達。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平的表達,但通常只持續幾天;后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上,宿主細胞可長期表達目的基因。

       建立穩定細胞株,一種方法是根據基因載體的抗性標志選用篩選藥物。最常用的抗性標記基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin);另一種方法是熒光篩選,通過克隆化的方式來篩選。

       目前構建穩定細胞株常用慢病毒方法:利用慢病毒整合到宿主基因組的特性來篩選穩定株(可以在短時間內獲得高效率的穩定細胞株)。




客戶提供

① 待穩定轉染細胞株

② 穩轉質粒(可由伯信提供服務);

③ 慢病毒(可由伯信提供服務);


伯信提供

① 穩定轉染細胞株,≥5×106細胞

② 目的基因穩定表達或沉默載體構建報告(實驗儀器、試劑、方法、結果、結論);

③ 目的基因穩定表達或沉默效率驗證報告(實驗儀器、試劑、方法、結果、結論)。

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