細胞凋亡
發布時間 :2017-06-01
細胞凋亡檢測

      細胞凋亡是維持機體內環境穩定,清除衰老和無能細胞的重要機制。細胞凋亡與胚胎發育、自身免疫耐受、腫瘤發生、病毒感染等生理、病理過程密切相關,近年來一直是生物醫學領域各專業的研究熱點。

1.Annexin V/PI

      在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸只分布在細胞膜脂質雙層的內側,細胞發生凋亡最早期,膜磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內側翻向外側,這一變化早于細胞皺縮、染色質濃縮、DNA片斷化和細胞膜的通透性增加等凋亡現象。

      Annexin V是一種磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。

      碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但凋亡中晚期的細胞和死細胞由于細胞膜通透性的增加,PI能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin VPI匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。


2.TUNEL

       基因組DNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上熒光素(FITC)標記的dUTP (fluorescein-dUTP),從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測,達到檢測細胞凋亡的目的。


3.JC-1

       線粒體與細胞凋亡密切相關,其中線粒體跨膜電位的破壞,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中最早發生的事件之一,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。

       JC-1是一種陽離子脂質熒光染料,可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態,在低濃度時以單體的形式存在,高濃度時以多聚體形式存在,兩者的發射光譜不同,但均可在流式細胞儀綠色(FL-1)通道檢測出綠色熒光,JC-1可透過正常細胞膜以單體狀態聚集胞內,正常健康線粒體的膜電位具有極性,JC-1依賴于跨膜電位的極性被迅速攝入線粒體內,并因濃度增高而在線粒體內形成多聚體,多聚體發射光為紅色熒光;可被流式細胞儀的紅色(FL-2)通道檢測到,而細胞發生凋亡時,線粒體跨膜電位被去極化,JC-1從線粒體內釋放,紅光強度減弱,以單體的形式存在于胞質內發綠色熒光。根椐這一特征檢測線粒體膜電位的變化。


客戶提供

① 細胞:大于106

② 組織:完整組織,石蠟包埋室溫運輸

 實驗材料:0.5ug抗體/樣品;


伯信提供

① 原始檢測文件;

   實驗報告(實驗儀器、試劑、方法、結果、結論)


結果實例


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