Q:使用貴司的***試劑盒或技術服務有發表過文章嗎?是否可以提供參考?

A:有,請您參考網頁頂部“案例展示”部分,其中不乏客戶發表的高分文章,謝謝!


Q:貴公司RNA pulldown試劑盒是否包含探針呢

A:

含;轉錄調控及轉錄后調控系列試劑盒均不包含探針


Q:對于難轉染的細胞,應該如何提高其轉染效率?轉染效率又該如何確定?

A:1)對于貼壁細胞,采用轉染試劑轉染即可;

   2)對于比較難轉染的細胞,為提高轉染效率,可選購特殊要求的轉染試劑或者使用電轉的方法,

      但是由于電轉的方法對細胞損傷比較大,該方法未必是最佳的;

   轉染效率的確定,常用的是使用熒光標記的siRNA,通過熒光顯微鏡,共聚焦顯微鏡,流式細胞

   儀檢測等方法,但最終以達到基因過表達或者干擾的效率為準。


Q:基因為什么要強調mRNA水平檢測?可以直接檢測蛋白和功能嗎?

A:常規的基因檢測需要做到mRNA水平和蛋白水平同時說明,對于RNAi實驗,由于siRNA直接作

   用于mRNA,因此mRNA水平檢測是最直接在指標。

   一般認為,mRNA的降解直接的結果應該是對應蛋白質含量的下降,所以在蛋白水平的檢測結果

   也應該可以作為有效性的檢測指標。實際情況往往出現mRNA下降水平與蛋白下降水平不對應的現象。

   可能原因有:

   1)檢測時間:存在mRNA的下降尚未反映在蛋白量的變化上或者未達到足以檢測的可能,一般建

      議蛋白和功能檢測時間做調整退后。

   2)蛋白在細胞中的表達情況:mRNA的翻譯過程非常復雜,細胞內基因的表達總要維持一個平衡,

      某些蛋白表達量到一定的程度之后,足以維持其細胞功能,將可能暫時“關閉”表達的功能,轉

      錄出來的部分mRNA可能不參與蛋白翻譯的過程,因此,mRNA水平的下調與蛋白水平下調并非

      完全成正相關的關系。

   3)另外還可能會涉及到更加復雜的機制。


Q:RNAi中轉染時該如何分組?分組的目的是什么?

A:A組(必需) 針對目的基因siRNA knockdown目的基因的表達

   B組(必需) 陰性對照siRNA 用非特異的siRNA序列證明RNAi作用的序列特異性

   C組(必需) 轉染試劑對照 排除轉染試劑對細胞的毒性或對目的基因表達的影響

   D組(必需) 空白對照 用于檢測實驗過程中細胞的生長狀態

   E組(可選) 陽性對照siRNA 用于排除實驗體系和實驗操作的問題

   F組(可選) 熒光對照siRNA 用于轉染效率判斷,當不明確細胞轉染效率時,這一組為必需。


Q:RNAi效率多高才是好的靶點?

A:沒有明確的界定,干擾效率高低因不同的細胞類型和不同的基因而異。不同細胞類型的轉染效率

    也不盡相同,不同基因的表達水平也相差較大,主要看干擾效果而定。


Q:基因沉默/過表達效果不理想,應該如何處理?

A:最常見的影響沉默效果的兩個原因是:轉染效率低和siRNA序列設計的效果不理想。如果您初次

   使用siRNA或采用了新的細胞系,并發現沉默效果不佳,我們建議您對轉染效率進行檢測,并選擇

   優化轉染條件。如果您已經對實驗轉染條件進行優化但是問題依然存在,我們建議您換用另一種轉

   染試劑或是采用其他技術,這也許能提高轉染效率。如果已經提高了轉染效率但是沉默效果仍然未

   達到要求,可能是因為siRNA序列設計的效果不理想。




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